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重组肠激酶

重组肠激酶 REK08

CAS:9017-74-8  EC:3.4.21.9

 

【重组肠激酶产品简介

 

酶切位点:肠激酶可以切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键:天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸(DDDDK)。

氨基酸序列:雅心重组牛肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致

酶学性质:肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签。

基本特性:该酶经HPLC纯化,纯度高,特异性高,不含其他蛋白酶可以在较宽pH范围(4.5-9.5)和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。

 

【重组肠激酶|产品特性

 

来源

                重组大肠杆菌

产品外观

澄清、无色至淡黄色液体

活性

≥ 5.0 U/µl

纯度(蛋白电泳)

单一主条带

分子量(蛋白电泳)

25.8 ±2.6kDa

备注1U定义为在25℃,12h~16h之内,将0。5mg保存于25mM Tris-HCl 8。0 缓冲液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。

 

重组肠激酶|使用方法

25℃酶切条件:

反应体系:

29415828

反应条件:25℃过夜酶切,或完全酶切需16-24h,用SDS-PAGE检测酶切效果。

结果验证:使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物,反应温度是25℃,酶切不同时间梯度(8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h)

IMG_256

 

4℃低温酶切条件:4℃能对底物进行有效酶切,但需要将酶切时间延长至 48-64h,或增加 2-3 倍酶量。

酶切结果验证:使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物,反应温度是4℃,酶切不同时间梯度(8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h)

IMG_256

酶切优化和放大:

优化:可以对酶切条件进行优化,例如缓冲液 pH,融合蛋白浓度,EK的量,以及酶切时间,使融合蛋白能在稳定条件下被酶切,用 SDS-PAGE 检测酶切效果。

放大:选择优化后的反应条件,按该条件等比例放大,用 SDS-PAGE 检测酶切效果。

去除重组肠激酶的方法:使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析(例如 sigma T0637)去除重组肠激酶。

 

重组肠激酶|储存运输


储存稳定性:-20℃,24个月稳定;25℃,一周内,无活性损失。缓冲体系:50mM Tris-HCl,pH8。0,250 mM NaCl,2 mM Ca 2+,50%甘油。反复冻融5次,无活性损失。

运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。

 

重组肠激酶|产品优势

 

特异性特定的蛋白酶,切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点:天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸(DDDDK)。
无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原料。

质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产品批次间无差异,质量稳定。

纯度高:不含其他蛋白酶,无非特异性切割。

符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。

质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。


重组肠激酶|注意事项

 

酶切温度:不建议37℃条件下酶切,可能会有非特异性酶切出现。

酶切条件:在>200mM 咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油条件下,酶切效果受影响,可参照以下推荐方法进行酶切:

 

推荐方法:为获得理想酶切结果,请将样品透析到25mM Tris-HCl 8。0缓冲液中,再进行酶切。若不便透析,可将样品稀释咪唑含量在100mM以下,NaCl浓度在50mM以下,甘油浓度小于5%以下进行酶切,酶的用量与蛋白的比例不变(即1U酶切500µg蛋白)。

如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种,且不便去除,此时适当增加酶量或延长酶切时间,也可达到较好酶切效果。

磷酸盐的影响:磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用,痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性,因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。

去除肠激酶:本品是具有高酶活力重组肠激酶,切割蛋白使用量少,可不考虑除去。后续如需去除重组肠激酶,可用阴离子交换树脂(eg.DEAE-FF)对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下:

平衡缓冲液:25 mM Tris-HCl pH 8。0

洗脱缓冲液:25 mM Tris-HCl pH 8.0,含100 mM NaCl

酶切效果:蛋白酶切效果不好,可适当增加酶量,或适当延长酶切时间。

 

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重组羧肽酶B;序列分析纯胰蛋白酶;重组人胰蛋白酶;重组抑肽酶。

 

 

 

 

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